褪黑素对氧化应激损伤小鼠睾丸支持细胞的作用及机制

目的 探讨褪黑素对过氧化氢诱导的小鼠睾丸支持细胞TM4细胞氧化损伤的保护作用及相关调控机制.方法 体外培养小鼠睾丸支持细胞TM4细胞,采用随机数字表法分为对照组、过氧化氢组、过氧化氢+褪黑素组以及褪黑素组,采用甲氮甲唑蓝法检测褪黑素和过氧化氢对TM4细胞生长的影响以及褪黑素对过氧化氢诱导的TM4细胞氧化损伤的保护作用;采用试剂盒检测细胞内丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量;酶联免疫吸附法检测上清液中睾酮和促卵泡生成素(FSH)含量;Western blot检测细胞磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关分子PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的蛋白表达.结果 对照组、过氧化氢组、过氧化氢+褪黑素组、褪黑素组细胞存活率分别为(1.00±0.17)％、(0.73±0.05)％、(0.92±0.04)％、(1.14±0.08)％,各组比较差异有统计学意义(P<0.05),与对照组相比,过氧化氢组细胞存活率降低(P<0.01);与过氧化氢组相比,过氧化氢+褪黑素组细胞存活率升高(P<0.05).与对照组相比,过氧化氢组丙二醛表达升高,SOD、CAT、GSH-Px表达降低(P<0.01);与过氧化氢组相比,过氧化氢+褪黑素组丙二醛降低(P<0.05),SOD、CAT、GSH-Px表达升高(P<0.05或P<0.01);与过氧化氢+褪黑素组相比,褪黑素组丙二醛表达降低(P<0.05),SOD、CAT表达升高(P<0.05).与对照组相比,过氧化氢组睾酮和FSH表达降低(P<0.01);与过氧化氢组相比,过氧化氢+褪黑素组睾酮和FSH表达升高(P<0.01).与对照组相比,过氧化氢组PI3K、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显下降(P<0.01);与过氧化氢组相比,过氧化氢+褪黑素组PI3K、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高(P<0.01);各组Akt蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 褪黑素能有效抑制过氧化氢诱导的TM4细胞氧化应激损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路相关.