苜蓿花叶病毒RT-PCR和RT-qPCR检测技术体系的

为准确检测侵染马铃薯核心种苗和种薯的苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV),以AMV马铃薯分离株为阳性材料,建立AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和基于 EvaGreen 及 TaqMan 探针的反转录实时荧光定量PCR(reverse transcription real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)检测技术,比较3种方法的检测灵敏度,并测定不同马铃薯品种6种组织和桃蚜Myzus persicae、蓟马体内AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量.结果表明:建立的TaqMan探针RT-qPCR法对RNA 1和RNA2 的检测灵敏度分别为 1.45×101 copies/μL和 1.46×101 copies/μL,分别是EvaGreen RT-qPCR法和RT-PCR法的10倍;建立的TaqMan探针RT-qPCR法对RNA 3的检测灵敏度与EvaGreen RT-qPCR法相同,为1.15×102 copies/μL,是RT-PCR法的10倍.丽薯15号6种组织中AMVRNA 1、RNA2和RNA3的含量为3.04×106～1.67×108 copies/μL,以叶片中病毒平均含量最高;中薯21号6种组织中AMVRNA 1、RNA 2和RNA 3的含量为2.94×102～4.78×108copies/uL,未发现明显分布规律.蓟马体内 AMV RNA 1、RNA 2 和 RNA 3 的含量分别为 8.64×104～4.76×107、2.13×103～1.50×105和 8.08×103～4.96×105 copies/μL,RNA 1 的含量高于 RNA 2 和 RNA 3.桃蚜体内 AMV RNA 1、RNA 2 和RNA 3 的含量分别为 4.71×103～3.44×104、2.22×102～1.32×105和 5.41×101～8.08×102 copies/μL,RNA3的含量最低.表明RT-PCR法、TaqMan探针RT-qPCR法和EvaGreen RT-qPCR法均可有效扩增马铃薯6种组织和2种昆虫中的AMV.