星豹蛛PaCYP3001U16基因的克隆与表达分析

为探究细胞色素P450基因在星豹蛛Pardosa astrigera体内的表达特性及对溴氰菊酯胁迫的响应,采用反转录PCR技术克隆其细胞色素P450基因并进行序列分析,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)技术分析其在星豹蛛各发育阶段及雌雄成蛛不同部位的表达水平,同时分析其在溴氰菊酯不同浓度胁迫下和不同处理时间后的表达模式.结果显示,在星豹蛛雌成蛛中克隆得到1个细胞色素P450基因,其开放阅读框为1 473 bp,编码490个氨基酸,命名为PaCYP3001U16(GenBank登录号为MZ643213).PaCYP3001U16基因在星豹蛛各发育阶段均有表达,其中在成蛛期的表达量最高,在6龄幼蛛期的表达量最低;该基因在雌雄成蛛腹部的表达量显著高于在头胸部及足部的表达量.星豹蛛雄成蛛经LC10(5.151 mg/L)、LC30(8.619mg/L)和LC50(12.311 mg/L)溴氰菊酯处理12 h,PaCYP3001U16基因的表达量均被抑制,且在LC50处理下表达量最低.PaCYP3001 U16基因经LC30溴氰菊酯处理不同时间后表达趋势不同,在处理2 h和4 h表现为诱导效应,且在处理4 h的基因表达量最高,为对照的1.79倍;在处理8、12和24 h表现为抑制效应,在处理24 h的基因表达量最低;而处理48 h的基因表达量又开始升高,表现为诱导效应.表明星豹蛛PaCYP3001U16基因在不同发育阶段和成蛛不同部位的表达水平不同,且溴氰菊酯可以诱导该基因的表达,推测该基因参与星豹蛛的生长发育及对外源物质的代谢.