马铃薯Y病毒衣壳蛋白的表达、纯化与结晶条件筛选

为研究马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)衣壳蛋白(coat protein,CP)在体外表达及CP重组蛋白的晶体生长条件,通过EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ酶切及连接技术构建pET-32a-PVY CP原核表达载体,对PVY CP的诱导剂浓度进行优化,利用蛋白质纯化及脱盐技术对PVY CP进行纯化和脱盐,并分析PVYCP重组蛋白的晶体生长条件.结果表明,成功构建了 pET-32a-PVYCP原核表达载体;PVY CP在大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞BL21(DE3)原核表达系统中,于16℃下利用0.8 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达可获得高浓度的PVYCP可溶性蛋白;PVYCP重组蛋白在二水甲酸镁处理下可生长出棒状结构晶体.