miR-216a、miR-301a 调控 BMPR2促进缺氧环境下肺动脉平滑肌细胞的增殖

目的:探讨miR-216a、miR-301a对缺氧环境下人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary arterial smooth muscle cells,HPASMC)增殖的影响并研究其发生机制.方法:采用CCK8法检测常氧和不同缺氧时间培养下HPASMC 的增殖活力,qRT-PCR 检测各组 miR-216a、miR-301a 和骨形成蛋白2型受体(bone morphogenetic protein receptor type 2,BMPR2)mRNA表达.CCK8和蛋白免疫印迹法分别检测转染了 miR-216a或miR-301a抑制物后HPASMC的增殖能力及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达水平.双荧光素酶报告分别检测BMPR2与miR-216a、BMPR2与miR-301a之间的关系.CCK8和蛋白免疫印迹法分别检测同时转染miR-216a或miR-301a联合BMPR2过表达质粒后HPASMC的增殖能力及BMPR2、PCNA的表达水平.结果:随着缺氧时间的延长,HPASMC的增殖活力和miR-216a表达增加,BMPR2 mRNA表达逐渐下降,miR-301a在缺氧24 h表达水平最高.下调miR-216a和miR-301a均显著抑制HPASMC的增殖活力及PCNA表达.双荧光素酶报告测定证实BMPR2分别是miR-216a和miR-301a的靶点.同时转染miR-216a或miR-301a联合BMPR2过表达质粒,BMPR2表达下降,细胞增殖活力及PCNA表达增加.结论:缺氧环境下,miR-216a、miR-301a通过抑制BMPR2促进HPASMC增殖,引发肺动脉高压的形成.