TAN通过Galectin-9及其配体Tim-3途径促进子宫内膜癌细胞迁移、侵袭及血管生成

目的:探究肿瘤相关中性粒细胞(tumor associated neutrophil,TAN)对子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)进展的影响,并初步研究相关的分子机制.方法:免疫组织化学染色检测15例子宫内膜癌患者肿瘤组织及癌旁组织内半乳糖凝集素9(Galectin-9)及其受体T细胞免疫球蛋白结构域分子3(Tim-3)、TAN的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测组织内Galectin-9与Tim-3在mRNA和蛋白上的表达水平;从患者血液中分离TAN细胞,通过瑞士-吉姆萨染液染色和流式细胞术进行鉴定;建立人子宫内膜癌Ishikawa细胞与TAN细胞共培养体系,并用Tim-3/Galectin-9信号竞争性拮抗剂α-lactose或rhGAL-9培养Ishikawa细胞,CCK-8检测Ishikawa细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移与侵袭能力,体外血管生成实验检测细胞血管生成情况,免疫荧光染色检测细胞内Galectin-9与Tim-3的荧光表达.结果:子宫内膜癌组织内Galectin-9和Tim-3均呈高表达,且存在中性粒细胞浸润现象;从患者血液中成功分离到TAN;Ishikawa细胞与TAN细胞共培养后,Ishikawa细胞增殖活性升高,迁移数目与侵袭数目均增加,形成血管的管道分支数目增加,Galectin-9与Tim-3的平均光密度值升高(P＜0.01);在Ishikawa细胞与TAN细胞共培养体系中添加40 μmol/L α-lactose处理后,Ishikawa细胞增殖活性下降,迁移数目与侵袭数目均减少,血管管道分支数目也减少,Galectin-9与Tim-3的平均光密度值降低(P＜0.01);而在Ishikawa细胞与TAN细胞共培养体系中添加2.0 μg/mL rhGAL-9作用后,Ishikawa细胞增殖活性升高,迁移数目与侵袭数目均明显增加,血管管道分支数目增加,同时,Galectin-9与Tim-3的平均光密度值升高(P＜0.01).结论:肿瘤相关中性粒细胞能够提高子宫内膜癌细胞增殖活性,促进肿瘤细胞的迁移、侵袭以及血管生成,其分子机制可能与调控Galectin-9及其受体Tim-3表达相关.