检测绵羊源爱知病毒D型荧光RT-PCR方法的建立和应用

绵羊源爱知病毒D型(ovine Aichivirus D)是在国内绵羊中新发现的病毒,本研究根据绵羊源Aichivirus D 3D基因序列设计检测引物,通过反应体系和条件优化,成功建立了检测绵羊源Aichivirus D的TB Green染料法荧光RT-PCR方法,该方法特异性和稳定性良好,灵敏度高.对2020年4月-2021年5月采集自四川6个场253份绵羊粪便样本(健康羊的133份,腹泻羊的120份)进行检测,结果该病毒的平均检出率为8.7％,场阳性率为66.7％.其中,腹泻粪便样本中绵羊源Aichivirus D阳性率(17.5％)显著高于非腹泻粪便样本中绵羊源Aichivirus D阳性率(0.75％,P＜0.001).表明绵羊源Aichivirus D可能是引起以上地区绵羊腹泻的病原.从绵羊源Aichi-virus D 的阳性样本中成功克隆出大小为1 422 bp的13个完整的绵羊源Aichivirus D 3D基因,其核苷酸相似性为99.4％～100.0％.遗传演化分析发现这13株绵羊源Aichivirus D 3D基因与本实验室前期研究上传的绵羊源Ai-chivirus D 3D基因共同聚为单独的一个大支.本研究为绵羊源Aichivirus D的分子检测提供了一种新的方法和基础流行病学数据.