MIR6766的抗百草枯功能及其分子机制初探

目的:利用人肺癌细胞系A549研究对百草枯的潜在耐药基因及可能的分子机制.方法:使用CRISPR/Cas9全基因组敲除文库,在人肺癌细胞系A549中筛选出抗百草枯基因MIR6766和POR,将它们的sgRNA序列与CRISPR-LentiV2载体连接,分别构建敲除MIR6766、POR的A549细胞系.Q-PCR验证MIR6766敲除情况,CCK8法验证百草枯耐药性,Western印迹验证MIR6766与POR的关系.结果:筛选出抗百草枯基因MIR6766,构建了MIR6766敲除细胞系.与对照细胞相比,MIR6766敲除细胞和POR敲除细胞均表现出明显的抗百草枯作用.MIR6766敲除的细胞系中POR基因的mRNA与蛋白表达水平降低.结论:MIR6766表达水平下降可能诱导肺癌细胞的抗百草枯表型,其可能机制为间接降低了POR的表达水平,进而减弱百草枯对细胞的毒性作用.这些工作为进一步研究MIR6766对百草枯抗性作用的分子机制奠定了基础.