不同浓度的miR-2779对MDCK细胞Bak1表达的影响

[目的]探究不同浓度miR-2779表达水平变化对Bak1蛋白和mRNA表达的影响.[方法]将miR-2779模拟物(mimics)按照浓度分为30 nmol/L、50 nmol/L、75 nmol/L 和 100 nmol/L 组;抑制剂(inhibitor)分为75 nmol/L、100 nmol/L和120 nmol/L组,分别转染MDCK细胞,48 h后提取细胞总RNA,颈环法反转录miRNA,实时荧光定量PCR技术检测MDCK细胞中miR-2779和Bak1 mRNA表达水平,Western Blotting检测Bak1蛋白表达情况.[结果]与对照组相比,miR-2779 mimics转染组miR-2779表达水平均显著上调,75 nmol/L miR-2779 mimics转染组miR-2779显著上调 11.39±0.19倍(P＜0.001);75 nmol/L 和 100 nmol/L 组 Bak1 蛋白表达水平显著下调0.54±0.03、0.45±0.04倍;Bak1 mRNA表达水平均显著下调.miR-2779 inhibitor转染后75 nmol/L组miR-2779无显著变化,100 nmol/L 和 120 nmol/L 组显著下调0.621±0.03、0.649±0.03倍;100 nmol/L miR-2779 inhibitor 转染组中 Bak1 蛋白表达水平上调2.42±0.06倍.[结论]Bak1表达水平与miR-2779表达水平呈现负向调控,75 nmol/L miR-2779 mimics与100 nmol/L miR-2779 inhibitor为转染MDCK细胞的最佳浓度.miR-2779可调控MDCK细胞中的Bak1表达水平,可能通过其他凋亡信号通路上游因子调控Bak1表达,参与细胞凋亡过程.