miR-185通过靶向调控CDC42基因表达抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖和迁移

目的:分析miR-185以及细胞分裂周期蛋白42(CDC42)在骨肉瘤组织和细胞中的表达情况,初步探究miR-185是否通过调控CDC42影响骨肉瘤MG63细胞的增殖与迁移.方法:选取2020年1月至2021年1月于衡水市第四人民医院经病理确诊为骨肉瘤的的28例患者的癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法检测骨肉瘤组织中CDC42的表达,采用qPCR法检测骨肉瘤组织中miR-185的表达.双荧光素酶报告基因实验验证CDC42基因与miR-185间的靶向关系.根据转染物不同,将MG63细胞分为miR-185 mimic组、miR-NC组、miR-185 inhibitor组、NC-inhibitor组、CDC42组(转染CDC42过表达载体)及阴性对照(NC)组,采用划痕愈合实验、CCK-8法和流式细胞术分别检测miR-185和CDC42表达对MG63细胞迁移、增殖和周期的影响.构建骨肉瘤MG63细胞裸鼠移植瘤模型,采用免疫组化法、qPCR法和WB法检测过表达或敲降miR-185对移植瘤组织中Ki67与CDC42表达的影响.结果:与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-185表达明显降低,而CDC42表达显著升高(均P<0.01).CDC42是miR-185的靶基因.与对照组相比,miR-185 mimic组MG63细胞的迁移和增殖能力均受到抑制(均P<0.01),而CDC42组MG63细胞的迁移和增殖能力均升高、细胞周期阻滞于S期(均P<0.01);与miR-185组相比,miR-185+CDC42组MG63细胞的迁移和增殖能力均升高、S期细胞比例升高(均P<0.01).与对照组相比,miR-185 mimic组移植瘤组织中Ki67、CDC42表达均显著降低(均P<0.01),而miR-185 inhibitor组则相反(均P<0.01).结论:在骨肉瘤组织中,miR-185呈低表达而CDC42呈高表达,miR-185能够通过负调控CDC42的表达,从而抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖和迁移.