干扰UBE2N对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响

为了探究泛素结合酶2N(ubiquitin-conjugating enzyme 2N,UBE2N)对牛骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,MSCs)增殖和分化的影响,试验采用天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室冻存的牛MSCs建立成肌分化模型,设计UBE2N的siRNA(si-UBE2N)构建UBE2N的干扰模型,转染牛MSCs,并以转染si-NC作为对照;采用qRT-PCR和Western-blot方法分别检测转染后对UBE2N基因和蛋白表达的干扰效果;采用5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测si-UBE2N对牛MSCs增殖的影响;在荧光倒置显微镜下观察分化期(DM期)牛MSCs的肌管形成状态,通过qRT-PCR和Western-blot方法分别检测MSCs中肌细胞生成素(MyoG)和肌球重链蛋白(MyHC)基因和蛋白表达水平,分析转染si-UBE2N对牛MSCs分化的影响.结果表明:与对照组相比,转染si-UBE2N后UBE2N基因和蛋白相对表达量极显著降低(P＜0.01).干扰UBE2N后经EdU染色发现,牛MSCs的增殖率显著降低(P＜0.05).转染si-UBE2N后,与对照组相比,分化期牛MSCs的分化标志因子MyoG基因相对表达量极显著升高(P＜0.01),MyoG和MyHC蛋白相对表达量均极显著升高(P＜0.01),光学显微镜下转染si-UBE2N的牛MSCs融合形成的肌管数量增多且直径呈增大趋势.说明干扰UBE2N可以抑制牛MSCs的增殖并促进其成肌分化.