非洲马瘟病毒VP7蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗体制备
Chinese Veterinary Science（2022）
Abstract
为了表达非洲马瘟病毒(AHSV)VP7蛋白并制备其多克隆抗体,参考GenBank中已公开的AHSV基因序列,人工合成编码AHSV-1 VP7蛋白的S7基因全长序列,利用PCR技术扩增得到S7基因片段,将其克隆到pFastBac? HTb载体上,构建重组载体pFastBac?-AHSVS7,通过蓝白斑试验筛选出重组杆粒Bacmid-AHSVS7,并转染昆虫细胞,拯救获得重组杆状病毒.SDS-PAGE和Western-blot结果显示,AHSV-1 VP7重组蛋白在昆虫细胞中获得表达.利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的VP7蛋白,将其免疫新西兰大白兔制备相应的多克隆抗体,该抗体不仅能与杆状病毒重组表达的AHSV-1 VP7蛋白反应,且能识别BHK21细胞中表达的AHSV-1 VP7蛋白,具有很好的特异性.本试验成功利用杆状病毒系统表达了 AHSV-1 VP7重组蛋白,并制备了多克隆抗体,这为后续AHSVVP7蛋白功能的研究以及ELISA诊断方法的建立奠定了基础.
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