猪干扰素α2亚型的表达纯化及抗病毒活性测定
Animal Husbandry & Veterinary Medicine（2022）
摘要
为研究重组猪干扰素α2亚型(porcine interferon α2,poIFN-α2)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的抑制作用,试验构建了 pCSMH-poIFN-α2的大肠杆菌表达载体,采用温度诱导poIFN-α2表达后,收集包涵体并复性后,采用亲和层析的方法对poIFN-α2进行纯化.采用Western blot方法检测纯化后蛋白的特异性,结果显示该蛋白具有较好的特异性和反应原性.用不同浓度的重组poIFN-α2处理MARC-145和PAM细胞24h后,接种PRRSV(1 000 TCID50).24h后收集细胞,采用荧光定量PCR检测细胞内PRRSV ORF7的核酸水平,同时检测细胞上清液中PRRSV的TCID50.结果证明大肠杆菌表达的重组poIFN-α2可以有效抑制PRRSV的增殖.进一步检测重组poIFN-α2在PAM细胞上诱导干扰素刺激基因(ISG)的水平,结果证明重组poIFN-α2可有效诱导PAM细胞内ISG的上调.本研究为研发新一代抗病毒药物奠定了基础.
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