龙胆苦苷通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻小鼠急性肝损伤的作用

目的:探究龙胆苦苷(GPS)对四氯化碳(CCl4)诱导的急性肝损伤小鼠模型是否有保肝疗效及其对Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法:将60只小鼠随机分为6组,每组10只,分别为正常组、模型组、水飞蓟素(150 mg·kg-1)组及GPS高、中、低剂量组(200,100,50 mg· kg-1).给药组的小鼠按10 mL·kg-1灌胃处理,正常组和模型组灌胃相同量的蒸馏水,每天1次,连续灌胃给药10d后,除正常组腹腔注射花生油(10 mL·kg-1),其余各组腹腔注射0.12％ CCl4花生油(10 mL·kg-1)溶液建立小鼠急性肝损伤模型.腹腔注射后禁食16h,摘除小鼠眼球取血,收集肝脏组织.苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学改变.生化法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL),碱性磷酸酶(ALP),总超氧化物歧化酶(T-SOD),γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的水平,肝组织中丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠肝脏组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)含量.蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肝脏组织中TLR4,MyD88,NF-κB蛋白表达情况;免疫组化检测磷酸化NF-κB (p-NF-κB)的表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠的ALT,AST,ALP,TBIL,γ-GT及MDA水平显著升高(P＜0.01),T-SOD,GSH-Px活性显著降低(P＜0.01);与模型组比较,GPS中、高剂量组小鼠的ALT,AST,ALP,TBIL,γ-GT及MDA水平降低(P＜0.05,P＜0.01),T-SOD、GSH-Px活性明显上升(P＜0.05,P＜0.01);与正常组比较,模型组小鼠肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量显著升高(P＜0.01),TLR4,MyD88,p-NF-κB蛋白表达显著上升(P＜0.01);与模型组比较,GPS中、高剂量组小鼠肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量明显降低(P＜0.05,P＜0.01),TLR4,MyD88,p-NF-κB蛋白表达明显下调(P＜0.05,P＜0.01).结论:GPS对CCl4引起的急性肝损伤小鼠具有一定的保肝效果,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及减弱氧化应激反应相关.