健脾补肺方对幼龄哮喘大鼠cAMP/PKA/CREB信号通路的影响

目的:观察健脾补肺方对卵蛋白(OVA)致敏并攻击复制的幼龄哮喘大鼠模型气道炎症、高反应性及环磷酸腺苷(cAMP)信号通路活性的影响.方法:雄性SD大鼠75只,随机选取15只作为正常组,剩余大鼠随机分为哮喘模型组,健脾补肺方组(8.37 g·kg-1· d-1),氨茶碱组(40 mg· kg1·d-1)和地塞米松组(0.1 mg·kg-1·d-1),每组15只.用0.2％ OVA的氢氧化铝凝胶10点致敏,并以1％ OVA生理盐水溶液雾化攻击复制幼龄大鼠哮喘模型,并给予相应的药物处理.小动物肺功能仪观察大鼠气道高反应(AHR)变化,支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数及分类计数观察炎症细胞数量变化,苏木素-伊红(HE),马松(Masson)和碘酸雪夫氏(PAS)染色观察肺组织病理学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-4,IL-5,IL-13,γ干扰素(IFN-γ),肿瘤坏死因子(TNF)-α和血浆中cAMP水平变化;免疫组化法观察肺组织蛋白激A(PKA)蛋白表达变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观察肺组织环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB) mRNA和蛋白表达变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠气道阻力(RL)明显增加而Cdyn明显降低(P＜0.05),BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞比例显著升高,外周血IL-4,IL-5,IL-13,TNF-α水平显著升高而IFN-γ水平显著降低(P＜0.01),肺组织病理改变明显;cAMP水平显著下降,肺组织中PKA和CREB的表达显著下调(P＜0.01).与模型组比较,健脾补肺方可以抑制AHR,降低BALF中的白细胞总数和嗜酸性粒细胞比例及RL(P＜0.05),改善大鼠肺组织病理改变,增加Cdyn(Cdyn),上调大鼠血清中cAMP水平和肺组织中PKA和CREB表达(P＜0.01).结论:健脾补肺方能够改善幼龄哮喘大鼠的AHR,抑制气道炎症,减轻肺组织损伤,其机制可能与上调cAMP/PKA/CREB通路活性相关.