基于AngⅡ/TRPC6通路探讨当归芍药散对肾病综合征大鼠足细胞的保护机制

目的:探究当归芍药散(DSS)对肾病综合征(NS)大鼠血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)通路的影响和保护作用.方法:动物实验,160只SD大鼠通过2次尾静脉注射阿霉素(第1周4 mg· kg-1,第2周2 mg·kg-1)诱导NS模型,分为模型组(给予生理盐水),氯沙坦组(30 mg·kg-1·d-1),DSS低、中、高剂量组(4.3,8.6,17.2 g·kg-1·d-1),同时设置正常组.给药4周干预后,透射电镜观察肾脏超微病理改变,试剂盒检测24 h尿蛋白;同时用放射免疫法检测血浆中AngⅡ,钙调神经磷酸酶(CaN)含量的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾皮质中TRPC6,血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R),足细胞裂孔隔膜特异蛋白(Nephrin),天冬氨酸半胱氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达,免疫组化检测狭缝隔膜中TRPC6,AT1R的表达分布情况.细胞实验,通过AngⅡ刺激MPC5足细胞,随机分为正常组,AngⅡ组,AngⅡ+TRPC6特异性抑制剂SAR7334组,AngⅡ+5％DSS组,AngⅡ+10％DSS组,AngⅡ+15％DSS组,Western blot检测细胞TRPC6,AT1R,Nephrin,Caspase-3蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白含量显著升高(P＜0.01),血浆AngⅡ,CaN含量显著升高(P＜0.01),肾小球结构不完整,足突广泛融合,足突融合率显著增加(P＜0.01),肾皮质中AT1R,TRPC6表达分布增多,肾组织中AT1R,TRPC6,Caspase-3蛋白水平显著增高(P＜0.01),Nephrin蛋白水平显著降低(P＜0.01);与模型组比较,氯沙坦组和DSS高剂量组24 h尿蛋白含量显著降低(P＜0.01),血浆AngⅡ,CaN含量显著降低(P＜0.01),肾小球结构改善,足突融合率显著降低(P＜0.01),TRPC6,AT1R在肾皮质中的表达分布减少,肾组织AT1R,TRPC6,Caspase-3蛋白水平显著降低(P＜0.01),Nephrin蛋白水平显著升高(P＜0.01);同时与正常足细胞比较,AngⅡ刺激后足细胞AT1R,TRPC6,Caspase-3的蛋白表达水平显著增加(P＜0.01),Nephrin表达水平下降(P＜0.01);而与AngⅡ组足细胞比较,SAR7334组足细胞AT1R,TRPC6,Caspase-3蛋白水平显著降低(P＜0.01),Nephrin蛋白水平升高(P＜0.01).结论:DSS可以改善NS病理特征,可能是通过抑制足细胞内AngⅡ与TRPC6的相互作用,进而改善足细胞结构完整性,修复肾小球分子屏障损伤,减缓NS蛋白尿的发展进程.