EMA结合实时荧光PCR方法检测单核细胞增生李斯特氏菌

建立叠氮溴化乙锭(EMA)结合实时荧光PCR(qPCR)方法检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)活菌.以李斯特溶血素O(LLO)基因hly设计引物、TaqMan探针,用李斯特属典型菌、沙门氏菌等56株致病菌株验证特异性,不同质量浓度EMA处理进行qPCR检测.尝试脱氧胆酸钠溶液(SD)强化抑制效果,73份不同的人工污染食品、环境样本(卤鸡肉、牛奶、肉苷、垃圾渗滤液)测试实用性.结果表明,引物探针准确检测L.monocytogenes,对其他菌株无特异性扩增.EMA最适质量浓度2.5 μg/mL,经过15 min光激活与死菌DNA共价结合明显抑制了扩增,方法检出限为150 CFU/mL.SD处理L.monocytogenes活菌Ct值增加.与传统培养法比较,EMA-qPCR方法检测100％准确,操作简单、省时高效,在食品、环境方面应用前景广阔.