半枝莲标准汤剂的指纹图谱建立与抗氧化活性成分的化学模式识别

目的 测定半枝莲标准汤剂中总黄酮的含量,评价其体外抗氧化活性,建立其指纹图谱,并进行化学模式识别分析.方法 采用紫外-可见分光光度法测定半枝莲标准汤剂中总黄酮含量(以野黄芩素计);采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、2,2′-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除实验考察半枝莲标准汤剂的体外抗氧化活性;采用高效液相色谱(HPLC)法,以野黄芩苷峰为参照峰,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)》绘制16批半枝莲标准汤剂的指纹图谱并进行相似度评价,确定共有峰;采用SPSS 24.0软件进行Pearson相关性分析,筛选具有体外抗氧化活性的潜在物质,并以其为变量,采用SPSS 24.0、SIMCA 14.1软件进行聚类分析和主成分分析.结果 总黄酮检测质量浓度的线性范围为2.106～21.06μg/mL(R 2=0.9993);精密度、重复性、稳定性(120 min)试验的RSD均小于2％;加样回收率为100.62％(RSD=0.55％,n=6);总黄酮含量为0.634～1.053 mg/mL.DPPH自由基清除实验的半数抑制浓度(IC50)为1.120～3.602 mg/mL,ABTS自由基清除实验的IC50为0.684～1.327 mg/mL;相关性分析结果显示,半枝莲标准汤剂中总黄酮含量与DPPH自由基、ABTS自由基清除实验的IC50均呈负相关,相关系数分别为-0.976、-0.940(P<0.01).16批半枝莲标准汤剂共有18个共有峰,相似度为0.964～0.997;共指认出其中4个共有峰,分别为野黄芩苷(8号峰)、野黄芩素(14号峰)、木犀草素(15号峰)、芹菜素(17号峰).半枝莲标准汤剂HPLC指纹图谱中3～4、8～9、12～15、17号峰峰面积与DPPH自由基、ABTS自由基清除实验的IC50均呈显著负相关(P<0.05或P<0.01).聚类分析结果显示,16批半枝莲标准汤剂可聚为两类,其中S2、S7～S8、S14～S16为一类,S1、S3～S6、S9～S13为一类;主成分分析将16批半枝莲标准汤剂分为两类,其中S2、S4、S7、S14～S16为一类,S1、S3、S5～S6、S8～S13为一类,S4、S13、S15样品的综合评分较高.结论 所建HPLC指纹图谱及化学模式识别分析方法可用于评价半枝莲标准汤剂的质量;3～4、8～9、12～15、17号峰及总黄酮是半枝莲标准汤剂清除DPPH自由基和ABTS自由基的潜在物质基础.