同型半胱氨酸通过上调Rap1A表达促进小鼠巨噬细胞增殖及M1极化

目的:研究Ras相关蛋白1A(Rap1A)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的ANA-1小鼠腹腔巨噬细胞增殖和M1极化的影响,并探讨其作用机制.方法:体外培养ANA-1细胞,建立高Hcy血症细胞模型,并将细胞分成对照(control)组、Hcy组、Hcy+Rap1A干扰腺病毒(Ad-shRNA/Rap1A)组和Hcy+阴性对照腺病毒(Ad-shRNA/GFP)组.采用CCK-8法和EdU染色检测各组细胞的增殖能力;ELISA检测细胞培养液中炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;RT-qPCR检测各组细胞Rap1A、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期抑制蛋白p27、M1极化标志物CD80和CD86及M2极化标志物CD163和CD200R的mRNA表达;Western blot检测Rap1A、PCNA和p27蛋白表达.结果:与control组相比,Hcy组细胞活力、EdU阳性细胞数目、细胞培养液中IL-6和TNF-α浓度、CD80和CD86的mRNA表达水平及Rap1A和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),而CD163和CD200R的mRNA表达水平及p27的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).与Hcy+Ad-shRNA/GFP组相比,Hcy+Ad-shRNA/Rap1A组细胞活力、EdU阳性细胞数目、CD80和CD86的mRNA表达水平及Rap1A和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),CD163和CD200R的mRNA表达水平及p27的mRNA水平和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05).结论:Hcy能够促进小鼠巨噬细胞增殖及M1极化,其机制与Hcy上调Rap1A表达有关.