瓜蒌薤白半夏汤正丁醇部位通过PI3K/AKT信号通路抑制缺血缺氧骨髓间充质干细胞凋亡

目的:在前期研究的基础上,探究瓜蒌薤白半夏汤正丁醇部位对缺血缺氧的骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的保护作用及机制.方法:90％乙醇回流提取+正丁醇萃取法制备瓜蒌薤白半夏汤正丁醇部位,传统黄酒加水煎煮法制备该方总提取物.分离培养大鼠BMSCs,将细胞分为正常对照组、模型对照组、瓜蒌薤白半夏汤150 μg/mL组和瓜蒌薤白半夏汤正丁醇部位50 μg/mL组.造模组以无血清的培养液、缺氧气体(5％CO2+94％N2+1％O2)处理24 h诱导细胞凋亡.以相应药物处理细胞24 h.通过倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫荧光、Western Blot检测BMSCs中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)蛋白的表达位点及磷酸化水平,分析磷酸化/非磷酸化蛋白的比值.结果:与正常对照组相比,模型对照组BMSCs存活率显著降低、凋亡率显著升高,PI3K、AKT蛋白的表达及磷酸化水平显著降低(P＜0.01);与模型对照组相比瓜蒌薤白半夏汤正丁醇部位50 μg/mL、瓜蒌薤白半夏汤150 μg/mL均能显著提高细胞存活率,降低细胞凋亡率;同时显著上调细胞内PI3K、AKT蛋白表达及磷酸化水平;且瓜蒌薤白半夏汤正丁醇部位的上述作用均优于瓜蒌薤白半夏汤总提取物(P＜0.05或P＜0.01).结论:瓜蒌薤白半夏汤正丁醇部位可能通过激活PI3K/AKT信号通路,逆转缺血缺氧诱导的BMSCs凋亡,提高缺血缺氧状态下干细胞的生存率.这可能是该方祛痰散结功效的部分生物学机制.