血清反应因子N端片段对鼻咽癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的:探讨血清反应因子N端剪切片段(SRF-N)对鼻咽癌(NPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制.方法:应用SRF全长(SRF-Full,1～508 aa)、SRF-N(1～254 aa)及阴性对照(NC)慢病毒颗粒感染人NPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检测Flag标签化融合蛋白的表达获得单克隆细胞株,CCK-8实验分析细胞活力的改变,划痕损伤修复实验和Transwell实验分析细胞迁移能力,细胞-基质黏附实验分析细胞黏附能力,Western blot检测细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)和上皮-间充质转化(EMT)相关指标的表达,双萤光素酶报告基因实验检测SRF-Full和SRF-N对Snail1启动子的调节效应.结果:成功用SRF-Full、SRF-N及NC慢病毒感染6-10B细胞,经嘌呤霉素抗性筛选结合Flag标签蛋白的表达获得相应的单克隆细胞株,分别标记为6-10BSRF-Full、6-10BSRF-N和6-10BNC.与6-10BNC细胞相比,6-10BSRF-Full细胞活力、迁移能力和与基质的黏附能力均显著增强(P<0.01),而6-10BSRF-N细胞较6-10BSRF-Full细胞活力、迁移能力及黏附能力均显著下降(P<0.01).6-10BSRF-Full细胞中波形蛋白(vimentin)、神经钙黏素(N-cadherin)和Snail1的表达水平较6-10BNC细胞显著升高(P<0.01),上皮钙黏素(E-cadherin)表达水平显著下降(P<0.01);而6-10BSRF-N细胞中vimentin、N-cadherin和Snail1的表达水平较6-10BSRF-Full细胞显著下降(P<0.05),E-cadherin表达水平显著上升(P<0.05).双萤光素酶活性实验结果表明,与NC相比,SRF-Full显著激活Snail1启动子(P<0.001);与SRF-Full相比,SRF-N显著抑制Snail1启动子活性(P<0.01).结论:SRF-Full促进而SRF-N抑制NPC细胞的增殖和迁移;SRF-N抑制Snail1启动子活性而介导NPC的EMT;SRF-N具有潜在的抗NPC作用.