烟曲霉的细胞外囊泡蛋白质及RNA分析

目的 分析烟曲霉的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)中的重要成分,以进一步明确曲霉致病机制.方法 通过离心法分离烟曲霉的囊泡,用电镜观察形态.采用马尔文纳米颗粒跟踪分析仪分析溶液中EVs的大小分布.通过质谱仪对囊泡内处理后的肽段进行分析.二级质谱数据使用Maxquant (v1.5.2.8)进行检索.检测RNA分布,通过数据库分析烟曲霉EVs中miRNA可能参与的一些通路.结果 电镜下烟曲霉的EVs可见明显的双层脂质结构.NTA发现烟曲霉分析的EVs大小主要集中在130 nm左右.EVs蛋白中不稳定蛋白为9种(15％),其余为稳定蛋白,而等电点(isoelec-tric point,PI)＞7的为6种蛋白.EVs中大部分是胞浆蛋白,其余比较多的是细胞外分泌蛋白,但仍有25％的蛋白不能定位.通过跨膜蛋白预测(transmembrane prediction,TMPred)和糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)预测,有5种蛋白存在于双层脂质膜上的蛋白.检测到RNA中rRNA和tRNA分别占59.7％和29.4％,而miRNA占0.25％,发现EVs miRNA主要可能影响代谢通路.结论 我们证实了烟曲霉也能分泌EVs,其中位直径为130 nm,含有较多种蛋白,以烟曲霉胞浆蛋白为主,RNA以rRNA和tRNA为主,而其中miRNA可能涉及多种信号通路.