海洋弧菌HN897β-琼脂糖酶基因vas1-1339异源表达及活性分析

海洋弧菌HN897株是一株高产琼脂糖酶的Vibrio astriarenae菌,前期功能缺失实验证明其 β-琼脂糖酶基因vas1-1339的缺失可显著降低弧菌HN897株的琼脂水解活性.文章在大肠杆菌中异源表达Vas1-1339基因编码蛋白,分析该基因的表达及蛋白功能活性.首先,构建含vas1-1339基因开放阅读框全长的表达载体pET28a-1339,利用原核表达技术在大肠杆菌中成功地异源表达了Vas1-1339琼脂糖酶;然后,利用卢戈氏碘液染色分析发现异源表达Vas1-1339琼脂糖酶的大肠杆菌能够高效水解琼脂,且异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)最优诱导浓度为10μmol·L-1;免疫印迹分析发现胞内基因表达产物羧基端可能存在切割现象,推测Vas1-1339琼脂糖酶存在复杂的成熟过程.对纯化的琼脂糖酶活性分析发现海洋弧菌HN897株β-琼脂糖酶Vas1-1339能够独立发挥琼脂糖降解功能.