鸭星状病毒3型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

鸭星状病毒3型(Duck astrovirus-3,DAstV-3)是近年来危害我国养鸭业的新发病原.本研究根据前期从樱桃谷鸭(Anas platyrhynchos domestica)胚中分离鉴定的DAstV-3分离株及已报道毒株的RNA依赖性的核糖核酸聚合酶基因(RNA-dependent RNA polymerase,RDRP)特征设计特异性引物,建立检测DAstV-3的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法.结果表明,该方法的标准曲线循环域值(Ct)与标准品模板浓度在1.15×101～1.15×107拷贝/μL间线性关系良好,相关系数R2和扩增效率分别为0.999和2.08;该方法特异性强,仅可检出DAstV-3,而对鸭常见疫病病原(DAstV-1,DAstV-2,禽流感病毒H9(H9 subtype Avian influenza virus),禽坦布苏病毒(Avian tambusu virus),鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus),番鸭细小病毒(Muscovy parvovirus))检测均为阴性;灵敏度高,其最低检测下限为23拷贝;并且重复性好,批内和批间重复试验变异系数分别为0.14％～0.65％和0.53％～0.94％,均低于1％.利用该方法对2018年6月至2021年3月的209份疑似DAstV-3感染病例样品进行检测,DAstV-3的阳性检出率为56.5％(118/209).综上结果表明,本研究所建立的方法特异性强、灵敏度高、稳定性好,为DAstV-3感染的快速诊断和流行病学监测提供了有力的技术支持.