荧光重组酶介导等温扩增检测食品中单增李斯特菌

[背景]单增李斯特菌为肉类及乳制品中常见的食源性致病菌,传统的培养法检测无法满足口岸大批量食品的快速检测要求,建立简便、灵敏、快速及现场可操作的技术至关重要.[目的]建立快速简便的荧光重组酶介导等温扩增(Recombinase-Aided Amplification,RAA)法检测单增李斯特菌,以适应口岸快速通关及监管的实际需求.[方法]根据单增李斯特菌hlyA基因保守区设计特异性引物、探针,通过引物两两组合结合探针筛选出扩增效率及灵敏度最佳的引物组合,优化反应温度及引物探针浓度,确定最佳反应条件.将建立的荧光RAA法应用于食品基质及实际样品检测中,同时与国标GB 4789.30-2016进行比对验证.[结果]单增李斯特菌荧光RAA最佳反应温度为42℃,最佳引物、探针终浓度均为400 nmol/L.建立的荧光RAA法特异性强,纯菌灵敏度达到3×102 CFU/mL.加标食品基质牛肉、大西洋鲑鱼及再制干酪LB2增菌只需4h,即可检测原始浓度分别达到0.3、3、30 CFU/mL的单增李斯特菌.荧光RAA法只需5 min即可观察结果,20-30 min完成扩增,速度及灵敏度明显高于国标法.[结论]建立的荧光RAA法可用于口岸和其他场所进行单增李斯特菌的快速检测与监控.