肠道病毒71型核酸检测试剂国家参考品的建立

目的 建立肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)核酸检测试剂国家参考品,用于该类试剂的质量评价.方法 收集培养多株EV株,包括不同亚型的EV71及不同型别的柯萨奇病毒(Coxsackievirus)株.经测序分析确证,再经商业化核酸检测试剂筛选验证后,分装、冻干组成国家参考品盘.利用数字PCR法(droplet digital PCR,ddPCR)对EV71代表性病毒株C4亚型进行核酸定量,作为最低检测限参考品.采用不同企业的试剂对参考品进行协作标定,分析标定后结果,最终确定参考品的质量标准,并考察其稳定性.结果 EV71核酸检测试剂国家参考品由6支阳性参考品、8支阴性参考品、1份精密度参考品和1支检测限参考品组成.其质量标准为:阳性参考品符合率应为6/6;阴性参考品符合率应为8/8;检测限应不高于3.6 x 103 copies/mL;重复检测精密度参考品10次,要求10次结果均为阳性,且对于荧光PCR法,要求其Ct值的CV＜5.0％.阳性参考品各样品在室温放置1d和反复冻融3次条件下相对比较稳定.结论 成功建立了评价EV71核酸检测试剂质量的国家参考品.