家蝇微生物感染对RNA干扰GNBP3基因的作用

为了研究家蝇Musca domestica微生物感染对RNA干扰GNBP3基因的作用,评价微生物感染后对下游抗菌肽水平的影响,本研究用RNA干扰技术沉默家蝇GNBP3基因探索最佳沉默时间及效果,检测RNA干扰后家蝇幼虫存活及化蛹情况,通过微生物喂食途径感染,采用实时荧光定量PCR方法检测抗菌肽基因(cecropins、defensin、diptericin)的表达情况.结果显示注射dsGNBP3后家蝇GNBP3基因在24 h达到有效沉默,沉默GNBP3基因后家蝇幼虫的化蛹率及存活率降低.RNA干扰GNBP3基因后,在未感染组中,cecropins的表达量显著性降低;白色念珠菌感染后,cecropins的表达与未感染组呈相似的趋势(P<0.0001);而大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染后,cecropins的表达量显著提高(P<0.05).对家蝇diptericin基因的表达量进行分析,在未感染组中,diptericin的表达量显著性降低(P<0.0001);而大肠杆菌和白色念珠菌感染后,diptericin的表达量显著提高(P<0.05);但金黄色葡萄球菌感染后其表达在两组间无统计学意义(P>0.05).对家蝇defensin基因的表达量进行分析,在未感染组中,defensin的表达量显著性降低(P<0.05);而白色念珠菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌感染后其表达在两组间均无统计学意义(P>0.05).家蝇GNBP3基因在24 h时得到有效沉默并使抗菌肽基因的表达降低,细菌感染能够增高抗菌肽基因(cecropins、diptericin)的表达,而真菌感染时抗菌肽基因的表达各不相同.推测各抗菌肽基因间呈协同调节抗真菌的作用,且家蝇GNBP3基因在抗真菌免疫中起到一定作用,但可能同时存在其它抗真菌途径以共同完成家蝇先天性免疫系统对真菌的免疫应答.