Notch信号通路配体DLL4通过促进M1型巨噬细胞分化加重糖尿病肾病免疫损伤

目的 探讨Notch信号配体DLL4在糖尿病肾病中(diabetic nephropathy,DN)的作用及其相关作用机制.方法 24只雄性CD-1小鼠随机分为对照组(Control组)、糖尿病肾病组(DN组)、过表达DLL4组(DN+DLL4组)及空载体组(DN+V组).DN组、DN+DLL4组及DN+V组小鼠通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病模型,并对DN+DLL4组与DN+V组小鼠经尾静脉注射pcDNA3.1 DLL4真核表达载体与pcDNA3.1空载体.于造模后12周收集相关标本.应用RT-PCR及Western blot检测各组小鼠中DLL4的mRNA及蛋白表达;应用免疫组化法检测DLL4的组织定位;利用化学分析仪器检测各组小鼠的血糖及24h尿蛋白水平;应用HE及PAS染色检测各组小鼠肾组织结构变化;透射电镜观察肾组织超微结构改变;利用Western blot 检测各组小鼠肾组织中M1巨噬细胞型标记物iNOS与CD16/32及M2型巨噬细胞CD206的蛋白表达;细胞流式技术检测各组小鼠肾组织单核细胞中M1与M2型巨噬细胞所占比例.结果 与Control组相比,糖尿病肾病小鼠中DLL4的mRNA及蛋白表达显著增加,而DN+DLL4组小鼠的DLL4表达水平显著高于DN组与DN+V组;免疫组化结果显示DLL4主要表达于肾组织的内皮细胞中;过表达DLL4能够显著促进糖尿病肾病小鼠的24h尿蛋白含量,但不影响小鼠的血糖浓度;过表达DLL4能够明显加剧糖尿病肾病小鼠的肾组织损伤,引起足细胞发生融合或断裂,加重系膜基质的沉积;过表达DLL4能够诱导巨噬细胞的M1型分化,增加M1标记性分子iNOS与CD16/32的蛋白表达.结论 Notch信号通路配体DLL4通过促进巨噬细胞的M1型分化加剧肾组织结构及功能的损害,最终加重糖尿病肾病的病理损伤.