miR-433-3p通过靶向下调GALNT1调控肺癌细胞的生物学行为

为了探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制,该研究在体外培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B以及肺癌细胞系H1299、Calu-3和Calu-6.采用定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测上述细胞的miR-433-3p和N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(GALNT1) mRNA的表达情况,采用Western blot检测上述细胞的GALNT1蛋白水平,筛选miR-433-3p和/或GALNT1 mRNA和蛋白表达相对较高的肺癌细胞系,并将筛选的细胞采用转染技术分为miR-NC组(空白转染对照组)、miR-433-3p组(miR-433-3p过表达组)、si-NC组(空白沉默对照组)、si-GALNT1组(GALNT1沉默组)、miR-433-3p+pcDNA组(miR-433-3p与pcDNA共转染组)、miR-433-3p+pcDNA-GALNT1组(miR-433-3p与pcDNA、pcDNA-GALNT1共转染组).采用MTT、Transwell、流式细胞术和Western blot检测细胞活性、迁移、侵袭、凋亡及相关蛋白表达情况;采用双荧光素酶报告实验检测miR-433-3p和GALNT1的靶向关系.研究发现,与BEAS-2B比较,肺癌细胞中miR-433-3p表达水平显著较低(P＜0.05),GALNT1表达显著升高(P＜0.05),肺癌细胞H1299的miR-433-3p最低,GALNT1 mRNA和蛋白表达相对较高,因而选择肺癌细胞H1299进行研究.过表达miR-433-3p或干扰GALNT1均显著降低肺癌H1299细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡过程,且Cy-clinD1、MMP-2、MMP-9和Bcl-2表达水平显著降低(P＜0.05),p21和Bax表达水平显著升高(P＜0.05).miR-433-3p靶向调控GALNT1表达(P＜0.05).上调GALNT1逆转了过表达miR-433-3p对肺癌H1299细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响(P＜0.05).该研究得出,miR-433-3p通过负调控GALNT1影响肺癌H1299细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡行为.