基于多重串联式PCR基因碟片研发利什曼原虫检测技术

目的 本研究基于多重串联式PCR基因碟片(MT-PCR)技术,建立我国口岸重点关注的杜氏利什曼原虫(Leish-maniasis donovani)、婴儿利什曼原虫(Leishmaniasis infantum)、热带利什曼原虫(Leishmaniasis tropica)和硕大利什曼原虫(Leishmaniasis giganteum)高通量检测方法.方法 根据利什曼原虫基因组学结果,对比分析不同利什曼原虫,针对ITS-1、ITS-2、P0、RACK基因设计引物,同时设计品系特异性引物,使用巢式荧光定量PCR检测各个基因.结果 4个基因组的扩增产物都可以形成明显的特异熔解峰,4个基因组的扩增曲线差异明显.ITS-1、P0、ITS-2、RACK的检测限均可达到103 copies/μl,批内和批间重复变异系数都小于5％.针对4种利什曼原虫检测的灵敏度均为100％,特异性为99.42％,准确性为99.55％.结论 MT-PCR能够用于利什曼原虫高通量检测工作,有益于丰富传染病检测途径,提高口岸输入性传染病检测效率.