去甲斑蝥素通过调节Hedgehog信号通路对卵巢癌耐药细胞株肿瘤干细胞活性的影响
China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy(2021)
Abstract
目的:观察去甲斑蝥素(NCTD)对两种不同的卵巢癌耐药细胞株中肿瘤干细胞活性的影响,探讨NCTD抑制卵巢癌耐药细胞株细胞增殖的可能机制.方法:采用低浓度加量持续诱导法构建卵巢癌顺铂和紫杉醇耐药细胞株,分别命名为A2780Cis顺铂耐药株和SKOV3Pac紫杉醇耐药株.采用CCK-8活性实验检测NCTD对卵巢癌耐药细胞株细胞增殖的影响.采用流式分选技术分离卵巢癌耐药细胞株中CD44+/CD24-肿瘤干细胞样细胞,分别用顺铂、紫杉醇及NCTD处理,使用流式细胞技术检测顺铂、紫杉醇及NCTD处理对卵巢癌亲本细胞及耐药株中干细胞样细胞凋亡的影响.顺铂、紫杉醇及NCTD分别处理卵巢癌耐药细胞株,Western Blot检测肿瘤干细胞标志物Nanog、Sox2和Bmi1的表达情况以及Hedgehog信号通路分子Ptch-1和Shh的表达情况.结果:CCK-8活性检测显示NCTD抑制卵巢癌耐药细胞株A2780Cis和SKOV3Pac的细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性.细胞凋亡检测显示NCTD、顺铂和紫杉醇对A2780Cis顺铂耐药株和SKOV3Pac紫杉醇耐药株中CD44+/CD24-肿瘤干细胞样细胞均能产生诱导凋亡作用,其中NCTD诱导凋亡作用最为显著.Western Blot检测显示NCTD可下调A2780Cis顺铂耐药株和SKOV3Pac紫杉醇耐药株干细胞标志物Nanog、Sox2和Bmi1的表达.与顺铂和紫杉醇比较,NCTD处理组Hedgehog信号通路分子Ptch-1的蛋白表达水平上升,Shh的蛋白表达水平下降.结论:NCTD可有效抑制卵巢癌耐药细胞株的增殖,诱导卵巢癌耐药株中肿瘤干细胞样细胞的凋亡,其作用机制可能与调节Hedgehog信号通路有关.
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