Effect of Bushen Huayu Shengxin Decoction(补肾化瘀生新方)on Paracrine Effect and Differentiation Rate of Mesenchymal Stem Cells by Optimizing Ischemic and Hypoxic Microenvironment
Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine(2021)
Abstract
目的 观察补肾化瘀生新方优化缺血缺氧微环境对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)旁分泌效应调控作用,探讨其对MSCs增值分化能力的影响.方法 采用无血清的1640培养基和低氧细胞工作站培养24 h建立缺血缺氧微环境细胞体外模型.随机分为:正常组:以完全培养基培养(L-DMEM+ 10% FBS);对照组:加入生理盐水血清培养基,放入低氧细胞工作站培养24 h;模型组:以完全培养基培养(L-DMEM+ 10% FBS),低氧细胞工作站培养24 h;治疗组:加入含有补肾化瘀生新方含药血清培养基,低氧细胞工作站培养24 h.采用液相色谱-串联质谱技术分析鉴定补肾化瘀生新方大鼠体内吸收入血成分.采用流式细胞仪检测MSCs细胞周期、ELISA法检测VEGF、bFGF、SDF-1、IL-10和TNF-α含量变化;免疫细胞化学染色检测NF-κBp65的细胞核转位;实时荧光PCR技术检测microRNA-124a-mRNA表达情况;Western blot检测microRNA-124a蛋白表达;免疫荧光技术检测MSCs向内皮细胞、神经元、神经胶质分化情况.结果 与正常组比较,模型组S期细胞数增多,G0/G1期明显降低(P<0.05),与模型组比较,治疗组、对照组S期细胞数减少,G0/G1期比例逐渐升高(P<0.05),与对照组相比,治疗组S期细胞数减少,G0/G1期比例逐渐升高(P<0.05).与正常组比较,模型组VEGF、bFGF、SDF-1、IL-10降低明显(P<0.05),与模型组比较,治疗组VEGF、bFGF、SDF-1、IL-10增多明显(P<0.05),与治疗组相比,对照组VEGF、bFGF、SDF-1、IL-10减少(P<0.05).随缺血缺氧时间延长VEGF、bFGF、SDF-1、IL-10呈减少动态变化.与正常组比较,模型组NF-κBp65、TNF-α、mi-croRNA-124a-mRNA和蛋白表达增多明显(P<0.05),与模型组比较,治疗组NF-κBp65、TNF-α、microRNA-124a-mRNA和蛋白表达降低明显(P<0.05),与治疗组相比,对照组NF-κBp65、TNF-α、microRNA-124a-mRNA和蛋白表达增多(P<0.05).随缺血缺氧时间延长NF-κBp65、TNF-α、microRNA-124a-mRNA和蛋白表达呈升高动态变化.与正常组比较,模型组GFAP、Ⅲβ-Tubulin、VWF阳性细胞数增多明显(P<0.05),与模型组比较,治疗组GFAP、Ⅲβ-Tubulin、VWF阳性细胞数增多明显(P<0.05),与治疗组相比,对照组GFAP、Ⅲβ-Tubulin、VWF阳性细胞数降低明显(P<0.05).随缺血缺氧时间延长GFAP、Ⅲβ-Tubulin、VWF阳性细胞数呈升高动态变化.补肾化瘀生新方动物含药血清共分析鉴定出阿魏酸、黄芩苷、梓醇、地黄苦苷、甲基异茜草素、大黄素甲醚6个为主要吸收入血成分.结论 补肾化瘀生新方通过优化缺血缺氧微环境调控MSCs旁分泌效应可以提高MSCs增殖、分化能力,其体内吸收入血成分可能是参与此过程发挥药效的物质基础.
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