Rho相关激酶抑制剂Y27632对小鼠腔前卵泡体外发育的作用

目的 探讨Rho相关激酶(ROCK)抑制剂Y27632在小鼠腔前卵泡体外发育中的作用.方法 取出生12.5d的小鼠卵巢,机械法收集单枚腔前卵泡,采用超低吸附96孔板模拟3D环境对其进行培养.设置对照组和含有Y27632的实验组,通过形态学观察、卵泡直径的变化、成熟卵泡的数量、成熟卵母细胞纺锤体的变化等来评估卵泡的整体发育情况.采用Real-time PCR技术检测颗粒细胞中卵泡刺激素受体(FSHR)、卵母细胞中骨形态发生蛋白15(BMP15)、生长分化因子9(GDF9)等以及凋亡相关基因(Bad、Bax和Caspase-3)的表达情况,同时,用细胞存活染料检测卵泡发育过程中颗粒细胞的凋亡情况.结果 ROCK抑制剂Y27632对卵泡直径增长和基本发育指标(存活数、成腔率和成熟率)无明显影响(P＞0.05),但对照组卵母细胞成熟后纺锤体组装出现异常.培养8d后,与对照组相比,实验组颗粒细胞特异性基因FSHR上调;卵母细胞特异性基因BMP15和GDF9上调,而叉头框O3 (FoxO3)下调;凋亡基因Bax、Bad和Caspase-3表达下调,实验组卵泡内的颗粒细胞凋亡明显少于对照组.结论 小鼠卵泡体外发育过程中,ROCK抑制剂Y27632能够抑制颗粒细胞的凋亡,防止卵母细胞纺锤体组装异常,进而提高卵泡体外发育质量.