高效分离1型单纯疱疹病毒感染细胞外泌体的研究

目的:建立并优化1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1, HSV-1)感染HEp-2细胞外泌体的分离方案。方法:收集HSV-1感染HEp-2的细胞培养上清，经差速离心和滤膜过滤对上清液进行预处理，使用外泌体提取试剂(total exosome isolation，TEI)结合尺寸排除色谱法(size-exclusion chromatography，SEC)的组合方案对粗提的外泌体进行分离和纯化，最后经超滤浓缩，获得高纯度外泌体。使用3种检测方法对纯化的外泌体进行表征鉴定。结果:Western blot结果显示，HSV-1感染或未感染HEp-2细胞外泌体均含有外泌体标志蛋白TSG101和CD9，另外，HSV-1感染细胞外泌体含有gB、VP16和ICP5等3种病毒蛋白。透射电镜观察显示，纯化的外泌体近似圆形，具有膜结构，直径50~150 nm，未发现典型HSV-1病毒颗粒。NTA结果显示，纯化的外泌体峰值粒径均为112.2 nm；单纯HEp-2细胞来源的粒子峰值浓度为3.4×10 9个粒子/ml，HSV-1感染细胞来源的粒子峰值浓度为4.1×10 9个粒子/ml。 结论:本研究建立了高效优化的HSV-1感染细胞外泌体分离纯化方案。