穿透支原体膜蛋白MYPE2350的表达及免疫活性分析

目的 对穿透支原体膜蛋白MYPE2350进行生物学信息学分析,构建重组原核表达质粒,表达、纯化并检测该蛋白的免疫学活性.方法 从NCBI网站获得穿透支原体特有MYPE2350蛋白的氨基酸序列,利用生物信息学软件预测和分析MYPE2350蛋白的理化性质、跨膜区、信号肽和B细胞表位等生物学特性.设计引物,PCR扩增MYPE2350基因片段,将其连接到质粒pET28a.将重组质粒pET28a-MYPE2350转化入大肠埃希菌BL21,用IPTG诱导重组MYPE2350蛋白的表达.分离包含体,使用尿素溶解后利用Ni2+亲和层析法纯化重组MYPE2350蛋白.用重组MYPE2350蛋白免疫小鼠,测定小鼠血清特异IgG含量和IgG2a/IgG1的比值,以及小鼠脾细胞分泌细胞因子的含量.结果 MYPE2350蛋白共有178个氨基酸,相对分子质量为19.4×103,为跨膜蛋白,具有3个跨膜区.该蛋白二级结构中α螺旋占43.82％,β折叠占17.42％,无规卷曲占35.39％,β转角占3.37％.Swiss网站预测的蛋白三级结构的匹配度和可信度不高.MYPE2350蛋白含有多个B细胞表位.构建的重组质粒pET28a-MYPE2350转化BL21后,经IPTG诱导表达重组MYPE2350蛋白,通过亲和层析纯化获得了纯度较高的MYPE2350蛋白.重组MYPE2350蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导小鼠分泌特异性抗体,且IgG2a/IgG1＜1.MYPE2350蛋白能诱导小鼠脾细胞IL-4和IL-5(Th2型细胞因子)高表达,但对IFN-γ和TNF-α(Th1型细胞因子)的影响较小.结论 克隆表达的重组穿透支原体特有膜蛋白MYPE2350具有良好的免疫原性,能诱导Th2型免疫应答.