孔雀源异刺线虫的形态学特征及分子鉴定

目的 用形态学和分子鉴定方法分析采自合肥市野生动物园孔雀的异刺线虫的特征.方法 从孔雀盲肠内分离虫体并鉴定虫体形态学特征.提取虫体基因组DNA,PCR扩增28S rRNA D2-D3基因和第二内转录间隔区(ITS2),测序后在GenBank上进行BLAST比对,用邻接法构建系统进化树.结果 共分离获得48条线虫.雌虫体长7.30～10.28 mm,雄虫体长5.34～7.38 mm,雌虫较雄虫长2～5 mm;雄虫交合刺长80.00 ～322.73 μm,雌虫阴门靠近虫体的尾端;雄虫与雌虫头部均含有3片唇,口腔短,食道前部圆柱状,末端膨大为食道球;雄虫尾端含有两根不等长的交合刺,雌虫尾部尖细光滑;虫卵呈椭圆形,灰褐色,含两层卵壳,卵壳较厚,壳面光滑,内含有单个胚细胞.PCR结果显示,28S rRNA D2-D3基因和ITS-2扩增产物分别为750 bp和1053 bp.BLAST比对结果显示,其28S rRNA D2-D3基因序列与圆线虫(GenBank登录号LC133189.1、LC133188.1)和异刺线虫(GenBank登录号LC185992.1、LC185989.1、LC186015.1、LC186006.1)的序列一致性分别为84.59％和84.46％:其ITS-2序列与贝拉异刺线虫(GenBank登录号KU529974、LC592732、LC592731)、鸡异刺线虫(GenBank登录号LC59279、LC5928003、LC592805、LC592797)和印度异刺线虫(GenBank登录号LC592808、LC592809、LC592807)的序列一致性分别为85.29％、80.32％和79.85％.基于28S rRNA D2-D3基因的系统进化树显示,本研究分离的线虫与圆线虫和异刺线虫较近,但不在同一分支上;基于ITS-2基因系统进化树显示,其与贝拉异刺线虫、鸡异刺线虫和印度异刺线虫较为接近,但不在同一分支上.结论 从孔雀分离的异刺线虫与已报道的异刺线虫在形态学上高度一致,初步判断其为异刺属线虫,但系统进化树分析结果显示其与已报道的异刺线虫存在一定的差异.