外源性HMGB1/mtDNA促进放疗残存胰腺癌细胞侵袭与迁移的作用及其机制

目的 探讨放疗诱导胰腺癌细胞释放的高迁移率族蛋白B1/线粒体DNA(HMGB1/mtDNA)对残存胰腺癌细胞侵袭与迁移的作用及其机制.方法 不同剂量(0、8 Gy)X射线处理胰腺癌PaTu8988细胞后,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测放疗后上清HMGB1浓度、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测放疗后上清mtDNA相对拷贝数.将放疗处理的胰腺癌细胞、外源性重组人高迁移率族蛋白B1(rhHMGB1)/mtDNA分别与PaTu8988细胞共培养,Transwell检测侵袭与迁移细胞数.外源性rhHMGB1/ mtDNA培养PaTu8988细胞,蛋白质印迹法检测环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)、干扰素基因刺激蛋白(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白水平变化;qRT-PCR检测干扰素-β(IFN-β)转录水平变化.同时构建HMGB1低表达(sh-HMGB1)、mtDNA部分缺失(ρ0)胰腺癌PaTu8988细胞株,放疗后与PaTu8988细胞共培养,蛋白质印迹法检测TBK1蛋白磷酸化水平变化.结果 放疗诱导HMGB1(t=-18.429,P＜0.001)和mtDNA相关基因COX1 (t=-12.370,P=0.006)、COX2(t=-8.503,P=0.014)和COX3(t=-10.321,P=0.009)释放至胰腺癌细胞外.放疗的胰腺癌细胞与rhHMGB1/mtDNA均能够促进Pa-Tu8988细胞的侵袭与迁移(t=-4.016,P=0.015;t=-0.563,P=0.006;t=-25.489,P=0.001;t=-19.157,P=0.003).外源性rhHMGB1/mtDNA抑制PaTu8988细胞中cGAS(t=2.895,P=0.048)、STING(t=-13.354,P=0.005)、p-TBK1 (Ser172)/TBK1(t=-7.347,P=0.012)和p-IRF3(Ser396)/ IRF3(t=-3.698,P=0.021)蛋白的表达;同时降低了PaTu8988细胞中IFN-β的转录水平,t=3.186,P=0.033.结论 放疗促进胰腺癌细胞释放HMGB1和mtDNA至胞外;放疗诱导的HMGB1/mtDNA通过抑制cGAS-STING通路的激活和IFN-β的生成促进残存胰腺癌细胞的侵袭与迁移.