盐裂皮肤-间接免疫荧光方法优化及在大疱性类天疱疮抗体检测中的应用

目的:优化盐裂皮肤-间接免疫荧光方法（IIF-SSS），评价其在大疱性类天疱疮（BP）抗体检测中的应用。方法:通过调整试验条件，利用正常人包皮或非包皮皮肤制备盐裂底物，分为3组：传统组在4 ℃旋转皮肤48~72 h；低温浸泡组在4 ℃浸泡皮肤48~72 h；室温浸泡组在室温25 ℃（23 ℃~27 ℃）浸泡皮肤24 h。收集2019年8月至2020年8月中国医学科学院皮肤病医院确诊的20例BP患者血清，采用倍比稀释法，利用上述3种试验条件制备的盐裂底物、未盐裂底物进行IIF检测。采用配对样本 t检验进行两配对样本的比较。 结果:低温浸泡组在48~72 h未出现真表皮分裂；室温浸泡组非包皮盐裂底物与传统组一样，真表皮分裂界面位于透明板下部。20例BP患者血清，在室温浸泡组盐裂非包皮皮肤、盐裂包皮及传统组盐裂非包皮皮肤这3种底物上，抗体滴度的倒数 M（ Q1， Q3）分别为5 120（2 560，17 920）、1 280（640，2 560）、1 280（640，2 560）。室温浸泡组制备的盐裂皮肤效果优于传统组，其中19例（95%）BP患者的滴定抗体滴度比传统盐裂方法高出1~5个倍比稀释度，差异有统计学意义（ t = 8.04， P<0.001）；而室温浸泡组制备的盐裂包皮与传统组相比，抗体滴度差异无统计学意义（ t<0.001， P>0.05）。在以正常未行盐裂的皮肤及包皮为底物的常规IIF中，抗体滴度的倒数分别为320（160，640）、480（160，1 120）；室温浸泡组盐裂包皮、非包皮皮肤及传统组盐裂非包皮皮肤这3种底物上IIF检测的抗体滴度与常规IIF检测的抗体滴度一致或高出1~7个倍比稀释度，差异有统计学意义（ t = 6.47、14.83、5.26，均 P<0.001）。 结论:采用室温25 ℃（23 ℃~27 ℃）浸泡法来制备盐裂底物，不仅耗时短，流程简单，而且检测BP抗体的敏感性等于甚至优于传统盐裂方法。