MANF对结直肠癌Caco-2细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 构建中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)过表达的结直肠癌Caco-2细胞系,探讨MANF对结直肠癌Caco-2细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响以及潜在的机制.方法 分别将重组质粒MANF-GFP与GFP空载体质粒转染Caco-2细胞,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot,WB)检测转染后Caco-2细胞中的MANF mRNA和蛋白产生量;Transwell检测MANF对Caco-2细胞迁移与侵袭能力的影响;用C C K8试验检测转染后各组Caco-2细胞增殖情况的不同;WB检测细胞中caspase-3的激活;使用flow cytometry检测Caco-2细胞凋亡情况;荧光素酶报告实验检测NF-κB的转录活性.结果 MANF-GFP和GFP质粒均成功转入Caco-2细胞中.给予外源性MANF蛋白可有效降低Caco-2细胞迁移、侵袭能力(P<0.01),明显减弱细胞增殖能力(P<0.01);上调Caco-2细胞cleaved caspase-3蛋白表达水平,促进其凋亡;同时,与对照组相比,转染MANF质粒可降低NF-κB的转录活性(P<0.01).结论 MANF可能通过下调NF-κB的转录活性,抑制Caco-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡.