地龙蛋白两种提取方法的活性比较

目的 比较两种不同提取方法对地龙可溶性蛋白提取率及活性的影响.方法 分别采用BCA法测定蛋白含量,羟胺法测定T-SOD活性,APTT、PT试剂盒测定抗凝血活性,琼脂糖-纤维蛋白平板法测定纤溶酶活性,MTT法检测PIG1细胞的存活率.结果 水提醇沉法和盐析法的提取率分别为(11.12±0.16)％、(4.96±0.19)％,纯度分别为(24.37±1.68)％、(42.49±1.9)％.水提醇沉法提取的地龙蛋白T-SOD和纤溶活性都明显高于盐析法,抗凝血活性略低于盐析法.两种蛋白均能显著提高PIG1细胞的存活率,并对H2O2诱导的PIG1细胞具有保护作用,但蛋白浓度不同时保护作用有所差异,0.1～0.2mg·mL-1的水提醇沉蛋白保护作用更强,0.4～0.8 mg·mL-1的盐析蛋白的作用更显著.结论 水提醇沉法提取的地龙蛋白的提取率、抗氧化和纤溶活性明显强于盐析法,其抗凝血活性和对皮肤细胞的保护作用与盐析法相似.