利用CRISP R/Cas9系统构建HMGA2敲除肝癌细胞株及其功能鉴定

目的 采用CRISPR/Cas9系统敲除肝癌细胞系HepG2的高迁移率蛋白A2(HMGA2)基因,探讨HMGA2敲除对于肝癌细胞生长、增殖、迁移以及侵袭的影响.方法 根据GenBank数据库搜索人HMGA2序列,利用在线sgRNA设计软件针对HMGA2的第一外显子以及第二外显子各设计一条sgRNA,构建靶向HMGA2的sgRNA重组敲除载体sgE1和sgE2,将sgRNA载体转染细胞,通过有限稀释法筛选得到HMGA2-/-细胞株.通过CCK8实验以及平板克隆形成实验检测HMGA2敲除对于HepG2细胞生长以及克隆形成能力的影响;采用Transwell实验检测HMGA2敲除对于HepG2细胞迁移与侵袭的影响.结果 相比于野生型,HMGA2-/-细胞株的生长速率减慢,克隆形成能力(121.83±21.68 vs 59.50±20.68,P<0.01)、迁移(359.67±32.53 vs 245.61±24.23,P<0.05)与侵袭(251.33±43.43 vs 47.00±10.00,P<0.01)能力显著下降.结论 HMGA2敲除降低了肝癌细胞HepG2的体外生存能力以及转移能力,HMGA2基因可以作为一个肝癌治疗的潜在靶点.