间充质干细胞条件培养基增强肺癌多倍体肿瘤巨细胞化学治疗药物敏感性的研究

目的:探讨间充质干细胞条件培养基(MSCs-CM)对肺癌多倍体肿瘤巨细胞(PGCC)化学治疗药物敏感性的影响。方法:使用1 μmol/L多西他赛处理A549细胞24 h(多西他赛A组)，撤除药物后继续在完全培养基中培养至第3天(多西他赛B组)，建立肺癌PGCC模型，使用MSCs-CM培养PGCC 48 h(PGCC+MSCs-CM组)，以正常培养的A549细胞(A549组)或PGCC(PGCC组)作为对照，流式细胞术检测细胞DNA含量，细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测A549细胞和PGCC对不同浓度多西他赛和顺铂的敏感性以及MSCs-CM对PGCC耐药性的影响，Western blot法检测相关蛋白表达。结果:多西他赛B组细胞体积明显增大，细胞核呈多核状态，PGCC亚群(DNA含量>4 N)比例均明显高于DMSO组和多西他赛A组( P<0.05)，成功建立肺癌PGCC模型，将多西他赛B组作为PGCC细胞。CCK-8检测结果显示，多西他赛对A549细胞和PGCC的IC 50值分别为(0.20±0.04)μmol/L和(11.15±2.47)μmol/L，差异有统计学意义( P<0.05)，顺铂对A549细胞和PGCC的IC 50值分别为(14.87±3.72)μmol/L和(30.03±4.59)μmol/L，差异有统计学意义( P<0.05)，PGCC对多西他赛和顺铂的耐药指数分别为55.75倍和2.02倍。与PGCC组相比，PGCC+MSCs-CM+多西他赛组吸光度值明显下降( P<0.05)，且明显低于PGCC+多西他赛组和PGCC+MSCs-CM组( P<0.05)。与PGCC组相比，PGCC+MSCs-CM+顺铂组吸光度值明显下降( P<0.05)，且明显低于PGCC+顺铂组和PGCC+MSCs-CM组( P<0.05)。Western blot检测结果显示，与A549组相比，PGCC组自噬微管相关蛋白轻链3A/B(LC3A/B)-Ⅰ/LC3A/B-Ⅱ、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、多药耐药性相关蛋白1(MPR1)表达明显上调( P<0.05)，兔抗人选择性自噬接头蛋白1(SQSTM1/P62)、BCL-2相关X蛋白(BAX)表达明显下调( P<0.05)；与PGCC组相比，PGCC+MSCs-CM组LC3A/B-Ⅰ/LC3A/B-Ⅱ、BCL-2、MRP1表达明显下调( P<0.05)，SQSTM1/P62、BAX表达明显上调( P<0.05)，且MRP1表达水平显著低于A549组( P<0.05)。 结论:肺癌PGCC对化学治疗药物的耐药性明显增强，MSCs-CM可能通过抑制自噬而增加肺癌PGCC对化学治疗药物的敏感性。