人Prx6的异源表达、酶学性质及结构分析

目的 构建大肠杆菌中人过氧化物氧还蛋白6(human peroxiredoxin 6,hPrx6)基因表达载体,并对其进行纯化,分析其酶学性质及结构.方法 利用PCR技术调取hPrx6基因片段,与pColdI载体连接,构建重组质粒pColdI-hPrx6,并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;经SDS-PAGE检测和Western blot鉴定,表达产物通过Ni-NTA亲和层析进行纯化,并对其酶学性质进行研究;对所表达的hPrx6融合蛋白利用在线软件进行结构分析.结果 重组质粒经PCR和酶切法鉴定构建成功;经Ni-NTA亲和层系纯化后得到的融合蛋白纯度可达95％;对其酶学性质的研究表明:其酶活力为(240±18)U/μmol,最适反应温度为30℃,pH为7;hPrx6酸性氨基酸总数多于碱性氨基酸总数,归类为不稳定蛋白.结论 本研究成功在大肠杆菌中表达可溶性hPrx6重组蛋白,此结果为研究其生物学功能奠定了基础.