SPON2上调Cyclin D1表达对胃癌细胞影响的研究

目的 探讨SPON2对胃癌细胞的影响及其机制.方法 收集2019-11-16-2021-2-24,在深圳市人民医院行胃癌根治术的7例原发性胃癌患者标本.蛋白质印迹法检测胃癌样本中SPON2、Cyclin D1和PCNA的表达,并对蛋白相对水平进行线性回归分析.以胃癌细胞株BGC-823和AGS为模型,转染SPON2 shRNA或SPON2 cDNA,检测SPON2对细胞增殖、细胞周期进程和DNA复制的影响.BGC-823细胞随机分成shNC组、shSPON2组、pcDNA-CCND1组、shSPON2+pcDNA-CCND1组,AGS细胞随机分成pcDNA-Vector组、pcDNA-SPON2组、shCTNNB1组、pcDNA-SPON2+shCTNNB1组、shCCND1组、pcDNA-SPON2+shCCND1组.蛋白质印迹法检测Cyclin D1蛋白表达水平,实时定量PCR检测Cyclin D1的mRNA水平,双荧光素酶报告基因实验检测转录因子与Cyclin D1启动子的结合.通过转染CyclinD1 shRNA或CyclinD1 cDNA,检测Cyclin D1对SPON2调控胃癌细胞增殖的影响.结果 在BGC-823细胞中,shSPON2组细胞相对增殖能力为0.58±0.07,低于shNC组细胞的相对增殖能力(1.00±0.09),差异有统计学意义,t=5.061,P=0.007.在AGS细胞中,pcDNA-SPON2组细胞相对增殖能力为1.58±0.19,高于pcDNA-Vector组细胞的相对增殖能力(1.00±0.13),差异有统计学意义,t=3.463,P=0.026.此外,与shNC组相比,shSPON2组Cyc-lin D1蛋白表达降低,而与pcDNA-Vector组相比,pcDNA-SPON2组Cyclin D1蛋白表达增加.实时定量PCR实验结果显示,Cyclin D1 mRNA相对表达量在shSPON2组中(0.47±0.12)比shNC组中(1.00±0.11)低,差异有统计学意义,t=4.595,P=0.010.而Cyclin D1 mRNA相对表达量在pcDNA-SPON2组中(2.80±0.19)比pcDNA-Vector组中(1.00±0.17)高,差异有统计学意义,t=10.010,P<0.001.与shNC组〔(100.00±7.38)％〕相比,shSPON2组〔(47.94±5.43)％〕中Cyclin D1的转录活性降低,差异有统计学意义,t=8.036,P=0.001.而pcDNA-SPON2组〔(216.92±26.51)％〕与pcDNA-Vector组〔(100.00±5.80)％〕相比Cyclin D1的转录活性升高,差异有统计学意义,t=6.093,P=0.004.结论 SPON2通过上调Cyclin D1的转录水平和蛋白表达促进胃癌细胞增殖.