地红方调控Keap1/Nrf2信号通路干预糖尿病血管内皮细胞氧化应激损伤的研究

目的 观察地红方对糖尿病血管内皮细胞Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路相关因子的影响.方法 传代后的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)以标准培养液培养24 h,更换培养液并随机分为5个组,每组10个样本.① 正常组:葡萄糖浓度为5.6 mmol/L的MEM培养液加10％的无药血清培养;②模型组:葡萄糖浓度为22.2 mmol/L的MEM培养液加10％的无药血清培养;③低剂量含药血清组(简称低剂量组):在模型组基础上培养6 h后,葡萄糖浓度为22.2 mmol/L的MEM培养液加5％含药血清及5％无药血清继续培养;④中剂量含药血清组(简称中剂量组):在模型组基础上培养6 h后,葡萄糖浓度为22.2 mmol/L的MEM培养液加7.5％含药血清及2.5％无药血清继续培养;⑤高剂量含药血清组(简称高剂量组):在模型组基础上培养6 h后,葡萄糖浓度为22.2 mmol/L的MEM培养液加10％含药血清继续培养.以上各组分组培养72 h后,Western blot检测各组血管内皮细胞质内Keap1的蛋白表达,实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组血管内皮细胞Nrf2、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)、NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQO1)和血红素加氧酶-1(HO-1)的mRNA表达.结果 与正常组比较,模型组Keap1蛋白表达明显下降(P<0.05);中剂量组、高剂量组Nrf2、GST、SOD、CAT、GPx、GCL、NQO1、HO-1的mRNA表达明显升高(P<0.05或P<0.01).与模型组相比,低、中、高剂量组Keap1蛋白表达和Nrf2、GST、SOD、CAT、GPx、GCL、NQO1、HO-1的mRNA表达均明显升高(P<0.05或P<0.01).与中剂量组比较,低剂量组GST、SOD、CAT、GPx、NQO1、HO-1的mRNA表达明显下降(P<0.05).结论 地红方可能通过调控Keap1/Nrf2信号通路治疗糖尿病血管内皮细胞氧化应激损伤.