草鱼原癌基因c-fos的原核表达载体构建及蛋白表达纯化
Journai of Longdong University（2022）
Abstract
为克隆草鱼原癌基因c-fos,构建原核表达载体,诱导表达并纯化c-Fos融合蛋白,为c-Fos蛋白的多克隆抗体制备奠定前期基础.在生物信息学技术方法指导下,利用引物设计软件Primer Premier 5设计c-fos基因的特异性引物,扩增得到883 bp长度的目标核酸片段,构建了原核表达载体pET-28a/c-fos,转化至E.coli Rosetta原核表达系统中通过IPTG诱导表达,检测到连接有His标签的c-Fos蛋白,最终通过His镍柱纯化得到了His-c-Fos融合蛋白.该融合蛋白可作为抗原用于后期c-Fos蛋白的多克隆抗体制备,为其组织和亚细胞定位及生物学功能研究奠定基础.
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