过氧化氢体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞氧化损伤模型的构建和分析

为给抗氧化损伤药物的开发利用和抗氧化损伤机制的研究提供理论依据和实验基础,本方法构建了过氧化氢(H2O2)体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)经典的氧化应激损伤模型.应用贴壁细胞培养法培养NIH-3T3细胞,采用不同浓度的H2O2处理NIH-3T3细胞不同时间模拟氧化损伤模型,通过CCK-8法观察H2O2引起NIH-3T3细胞半数致死率浓度(IC50)和时间;检测丙二醛(MDA)以及一氧化氮(NO)的表达水平;免疫荧光法观察H2O2诱导NIH-3T3细胞氧化损伤后细胞核内组蛋白γH2AX的表达变化.通过与对照组进行分析比较,300μMH2O2处理NIH-3T3细胞2h后,NIH-3T3细胞死亡率最接近50％.此时,NIH-3T3细胞内MDA和NO水平显著增高,细胞核中组蛋白γH2AX表达水平也明显提高.研究表明,H2O2体外诱导NIH-3T3细胞氧化应激模型的最适条件:300μMH2O2处理2h.