结肠癌来源外泌体通过HMGB1诱导中性粒细胞活化促进结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨结肠癌细胞来源外泌体在中性粒细胞和结肠癌细胞间的作用及其可能的作用机制.方法 体外培养中性粒细胞和结肠癌细胞SW480,分别用sh?NC和sh?HMGB1转染SW480细胞后分离相应外泌体SW480?exo、sh?NC?exo、sh?HMGB1?exo.各组外泌体分别处理中性粒细胞,同时设置PBS组;提取各组中性粒细胞上清液,再分别与SW480细胞共培养,依次记为SW480?exo+Neutrophils组、sh?NC?exo+Neutrophils组、sh?HMGB1?exo+Neutrophils组和PBS+Neutrophils组.采用Sytox green染色检测中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)的形成情况,Western blot检测HMGB1蛋白的表达水平,CCK?8检测细胞活力,克隆形成实验检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况.结果 成功构建敲低HMGB1结肠癌细胞模型并分离SW480?exo、sh?NC?exo和sh?HMGB1?exo.与PBS组相比,SW480?exo组中性粒细胞Sytox green荧光单位和HMGB1蛋白表达水平明显升高(均P<0.05);与sh?NC?exo组相比,SW480?exo组中性粒细胞中HMGB1蛋白表达和Sytox green荧光单位差异无统计学意义(均P>0.05),但sh?HMGB1?exo组细胞中HMGB1蛋白表达和Sytox green荧光单位明显降低(均P<0.05).SW480?exo+Neutrophils组SW480细胞活力、克隆形成数、迁移细胞数和侵袭细胞数均较PBS+Neutrophils组明显升高(均P<0.05),但与sh?NC?exo+Neutrophils组比较差异无统计学意义(均P>0.05);与sh?NC?exo+Neutrophils组相比,sh?HMGB1?exo+Neutrophils组SW480细胞活力、克隆形成数、迁移细胞数和侵袭细胞数明显降低(均P<0.05).结论 结肠癌细胞来源外泌体可能通过HMGB1诱导中性粒细胞NETs形成,从而促进细胞增殖、迁移和侵袭.