NF-κB参与感染诱导血管内皮细胞DcR3表达升高的初步研究

目的 利用体外人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)实验研究核转录因子-κB(NF-κB)参与感染诱导诱骗受体3(DcR3)表达升高的信号转导机制.方法 针对购置的商品化HUVEC,分别采用低、中、高3种浓度的脂多糖(LPS)0.1、1.0、10.0μg/mL、脂磷壁酸(LTA)5、50、500 ng/mL和酵母聚糖(zymosan)10、100、1000μg/mL刺激HUVEC,设置4个处理组:LPS组、LTA组、zymosan组和正常对照组(未经过LPS、LTA和zymosan刺激的HUVEC).流式细胞术检测细胞表面Toll样受体2(TLR2)和TLR4的表达,采用特异性抑制剂阻断NF-κB和MAPK信号通路后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中DcR3的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测细胞内DcR3 mRNA表达水平,Western-blot法检测细胞内DcR3蛋白的表达.结果 流式细胞术检测H U V EC细胞表面T L R2和T L R4的表达分别为(82.23％ ±2.15％)和(77.87％ ±1.06％).以低、中、高3个浓度刺激H U V EC细胞后,与对照组相比,低浓度组上清液中DcR3水平无明显升高;中、高浓度组DcR3水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);高浓度组DcR3水平比中浓度组明显增高,差异有统计意义(均P<0.05);随着时间延长,高浓度刺激后的H U V EC细胞上清液中DcR3的表达与对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).正常对照组、高浓度LPS组、高浓度LTA组以及高浓度zymosan组细胞内DcR3 mRNA的相对表达水平分别为(1.00±0.05)、(2.28±0.26)、(1.98±0.30)、(2.10±0.16).3种刺激物组的DcR3 mRNA和DcR3蛋白表达明显升高,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01).刺激12 h后,细胞内DcR3 mRNA的表达即明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).加入N F-κB抑制剂PD T C后,细胞上清液以及细胞内DcR3表达较未加抑制剂组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),而加入P38 MAPK抑制剂U0126和PD9859后,细胞上清液及细胞内DcR3的表达无明显影响.结论 LPS、LTA以及zymosan通过激活NF-κB信号通路诱导HUVEC表达DcR3.