NOD2受体在抗β2GPⅠ抗体诱导血小板炎性反应促血栓形成中的作用研究

目的 明确核苷酸结合寡聚域2(NOD2)受体在抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(anti-β2 GPⅠ)诱导血小板炎性反应,进而促血栓形成中的作用机制,探讨以NOD2受体为干预靶点对anti-β2 GPⅠ诱导的相关血栓形成机制的影响.方法 选取2018年1月至2021年3月哈尔滨医科大学附属第二医院经CT、MRI或动静脉造影诊断为血栓且anti-β2 GPⅠ阳性的患者69例为血栓组;选取同期体检健康者78例作为健康对照组.分别提取血栓患者、健康对照者的血小板和血浆,其中健康对照者血小板需与anti-β2 GPⅠ/β2 GPⅠ共孵育.利用实时定量PCR(RT-PCR)检测NOD2受体mRNA表达;ELISA检测白细胞介素(IL)-1β水平;免疫印迹法(Western blot)检测Toll样受体4(TLR4)、NOD2受体、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化情况;FeCl3诱导小鼠颈总动脉血栓形成,利用激光散斑超声血流仪监测血管闭塞时间.结果 与健康对照组相比,血栓组患者血小板NOD2受体mRNA表达和血浆IL-1β水平显著增加(P<0.05);anti-β2 GPⅠ/β2 GPⅠ刺激后血小板NOD2受体mRNA表达增加,刺激后上清液IL-1β水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与anti-β2 GPⅠ/β2 GPⅠ刺激后相比,加入p38 MAPK抑制剂SB203580后,IL-1β水平显著降低;TLR4抑制剂TAK242可部分抑制NOD2受体蛋白表达,显著抑制p38 MAPK磷酸化和IL-1β水平;姜黄素可使p38 MAPK磷酸化及IL-1β水平下降;向小鼠体内注射姜黄素可使anti-β2 GPⅠ/β2 GPⅠ诱导的血栓形成时间显著延长.结论 anti-β2 GPⅠ可通过TLR4调控NOD2受体/p38 MAPK信号轴影响IL-1β释放,姜黄素可通过抑制NOD2受体表达,降低p38 MAPK磷酸化及IL-1β水平,减缓anti-β2 GPⅠ诱导的炎性反应和血栓形成,有望为anti-β2 GPⅠ阳性血栓患者治疗提供新思路.